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Title: Desenvolvimento e avaliação da acurácia do sistema de filtração (BacFil 6.0) na detecção de bacilos álcool-ácido resistentes em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes com suspeita de tuberculose
metadata.dc.creator: Almeida Junior, Pedro Sousa de
Issue Date: Jul-2014
Abstract: A baciloscopia é o principal método diagnóstico da tuberculose (TB) em razão do seu baixo custo, rapidez e facilidade de execução. Porém sua sensibilidade é baixa, principalmente nas formas paucibacilares da doença. Nesse sentido, novas metodologias que resultem no aumento da sensibilidade da baciloscopia tornam-se absolutamente necessárias. Neste estudo, nos propusemos a aprimorar e padronizar o sistema de filtração BacFil e avaliar sua performance e acurácia em amostras paucibacilares (lavado broncoalveolar). Para alcançar esses objetivos desenvolvemos o estudo em duas fases. Na primeira fase, foram realizados ensaios para definir: 1) utilização de membranas brancas para visualização de BAAR corados por Auramina-O; 2) aumento do volume de NALC, utilização de pérolas de vidro no processo de digestão das amostras e mudança no sistema do suporte do pré-filtro; 3) meios de fixação da membrana de filtração na lâmina de microscopia; 4) limite de detecção da técnica; 5) aumento do volume de NaOCl e a influência desse aumento na visualização de BAAR na membrana. Verificou-se que: a membrana de policarbonato branca tem a mesma eficiência da membrana de policarbonato preta na visualização de BAAR fluorescentes; o método modificado utilizando maior concentração de NALC, pérolas de vidro e sistema de pré-filtro baseado em orifícios obteve 98% de passagem das amostras pelo sistema; a melhor forma de fixação da membrana na lâmina foi obtida por intermédio da utilização de fita dupla face; o limite de detecção da técnica de filtração utilizando o sistema BacFil versão 6.0 foi de 2 a 9 BAAR por mililitro de suspensão bacteriana com D.O de 0,250 ± 0,01 a 625nm; o aumento da concentração de NaOCl para 10% ajuda na passagem de um maior volume de amostra pelo sistema, porém ocasiona a diminuição da quantidade BAAR na membrana de filtração após o período necessário para todo o processo. Na segunda fase foi avaliado acurácia da técnica padronizada em 101 amostras de lavado broncoalveolar (LBA) de pacientes com suspeita de TB provenientes do Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes. Observou-se que a sensibilidade da técnica de filtração (BacFil versão 6.0) foi de 76% e especificidade de 95%. A sensibilidade obtida foi significativamente maior do que a observada na baciloscopia após centrifugação que foi de 59% (p = 0,001). No entanto, constatou-se uma diminuição de especificidade na técnica de filtração (95%) em relação a técnica de 8 centrifugação (99%). Concluímos que as modificações realizadas nos sistema de filtração permitiu sanar os problemas técnicos apresentados nas versões anteriores e aumentar a sensibilidade da baciloscopia de amostras paucibacilares (lavado broncoalveolar) para o diagnóstico da TB pulmonar.
The smear microscopy is the main diagnostic method of tuberculosis (TB) due to its low cost, fastness and easy execution. However, its sensitivity is low especially in the paucibacillary forms of the disease. Therefore, new methods that enhance the sensitivity of smear microscopy are required. In this study, we proposed to improve and standardize the BacFil filtration system and to evaluate its performance and accuracy in bronchoalveolar lavage (BAL). To achieve these goals we developed a study in two stages. In the first stage we conducted assays to define: 1) use of polycarbonate white membranes to visualize fluorescent AFB stained by Auramine- O; 2) increase the volume of NALC, addition of glass beads in the digestion procedures and changes in the prefilter support; 3) ways to fixate the membrane on the microscopy slides; 4) the detection limit of the technique; 5) increased concentration of NaOCl and its influence to visualize AFB on the filtration’s membrane. It was verified that: the polycarbonate white membrane has the same efficiency of the polycarbonate black membrane to visualize fluorescent AFB; the modified digestion method using higher volume of NALC and glass beads plus prefilter support system based on holes allowed 98% of the samples to pass trough the filtration system; the best way to fixate the membrane on the slides was with double-side tape; the detection limit of the technique using the BacFil system version 6.0 was 2 to 9 AFB per milliliter of a bacterial suspension with O.D. = 0,250 ± 0,01; the use of NaOCl 10% (v/v) helps the passage of a higher volume of samples through the system, however it causes AFB loss on the filtration membrane after the time needed to finish all the process. In the second stage it was evaluated the accuracy of the standardized technique in 101 BAL of patients with suspected TB coming from Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes. We observed a higher sensitivity of filtration technique using the BacFil version 6.0 system (76%) when compared to the concentrated smear microscopy (59%), and this difference is statistically significant (p = 0,001). However, it was detected a lower specificity of the filtration technique (95%) in comparison with centrifuged smear microscopy (99%). We concluded that the modifications made on the filtration system allowed us to solve the techinicals issues reported in previous versions, and to enhance the sensitivity of smear microscopy in paucibacillary samples (BAL) for the TB diagnosis.
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/1338
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