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Title: Detecção e caracterização de patotipos diarreiogênicos de Escherichia coli por métodos fenotípicos e genotípicos em indivíduos de todas as idades atendidos nas unidades de saúde de Vitória-ES
metadata.dc.creator: Cunha, keyla Fonseca da
Issue Date: Aug-2013
Abstract: A diarreia é a segunda causa de mortalidade em <5 anos e é responsável pela diminuição da produtividade na população economicamente ativa. Dentre os agentes infecciosos envolvidos, seis patotipos diarreiogênicos de Escherichia coli (DEC) merecem destaque: E. coli enteropatogênica (EPEC), E.coli enteroinvasora (EIEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroemorrágica ou produtora de toxina de Shiga (EHEC/STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli de aderência difusa (DAEC). O objetivo deste estudo foi determinar a frequência dos patotipos de DEC e caracterizar fenotípica e genotipicamente EAEC, DAEC, aEPEC e E. coli chain-like adhesion (CLA) isolados de fezes indivíduos de todas as idades atendidos nas Unidades de Saúde do município de Vitória, ES, entre janeiro de 2008 e junho de 2011. Os isolados de E. coli foram submetidos à: (i) PCR para detecção dos genes eae, bfpA, aat, lt, st, ipaH, stx1 e stx2; (ii) hibridização de colônia com as sondas eae, aat e daaC; (iii) adesão em cultura de células HEp-2 para evidenciar padrão de aderência agregativa (AA), difusa (DA) e chain-like adhesion (CLA). PCR para detecção de genes de virulência foi realizado em isolados de EAEC, CLA, DAEC e aEPEC. Isolados de EAEC e CLA, foram submetidos a testes de formação de biofilme e de película. Foram obtidos 328 espécimes fecais e E. coli foi isolada de 85,7%. Os seguintes patotipos foram identificados: EAEC (18,3%), DAEC (11%), aEPEC (2,6%), ETEC (0,7%). CLA foi identificada em 4,9% e EIEC, tEPEC e STEC não foram detectados. Dos 60 isolados de EAEC (AA) (25% aat+ por PCR e 35% por hibridização), fímbrias de aderência agregativa foram evidenciadas em baixa frequência (aggA- 1,7%, aafA- 0%, agg3A- 11,7%, hdA- 8,3%). EAEC típica correspondeu a 31,7% dos isolados de EAEC (aggR+), e foram significantes nestas a formação de biofilme, escore 3+ de produção de película e presença dos genes aat, agg3A, hdA, aap, sat, pet, set1A e iucA. Todos os isolados CLA apresentaram o gene pet, 87,5%, foram aggR-, formaram película e nenhum produziu biofilme. Dentre dos 42 isolados de DAEC (DA), a sonda daaC detectou 52,4%. PCR evidenciou adesinas afa/Dr (daaD e afa) em 59,5% e adesina AIDA-I não foi encontrada, sugerindo que outras adesinas estejam envolvidas na adesão da DAEC. Isolados de DAEC afa/Dr + foram estatisticamente mais isolados de <5 anos. Em aEPEC, os genes da ilha de patogenicidade OI-122 pesquisados, nleE, efa1/lifA e paa foram evidenciados em 30% dos isolados, todos provenientes de <5 anos. Características de virulência de tEAEC e DAEC Afa/Dr sugerem que sejam subpopulações relacionadas com diarreia. CLA não parece ser variante de EAEC.
Diarrhea is the second leading cause of mortality in <5 years and is responsible for decreased productivity in the economically active population. Among the infectious agents involved six diarrheagenics pathotypes of Escherichia coli (DEC) are worth mentioning: enteropathogenic E. coli (EPEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enterohemorragic E. coli or Shiga toxin-producing (EHEC/STEC), enteroaggregative E. coli (EAEC) and diffuselly adherent E. coli (DAEC). The aim of this study was to determine the frequency of DEC and to characterize phenotypic and genotypically EAEC, DAEC, aEPEC and chain-like adhesion E. coli (CLA) isolated from feces of all ages individuals treated at health units in the city of Vitória, between January 2008 and June 2011. E. coli were subjected to: (i) PCR for detection of eaeA, bfpA, aat, lt, st, ipaH, stx1 and stx2 genes; (ii) colony hybridization with eae, aat and daac probes; (iii) HEp-2 cells culture to show aggregative adherence (AA), diffuse (DA) and chain-like adhesion (CLA). PCR for detection of virulence genes was carried out in EAEC, CLA, DAEC and aEPEC. CLA and EAEC isolates were tested for biofilm formation and clump test. Fecal specimens (n=328) were obtained and E. coli was isolated from 85.7%. The following pathotypes were identified: EAEC (18.3%), DAEC (11%), aEPEC (2.6%), ETEC (0.7%). CLA was identified in 4.9% and EIEC, STEC and tEPEC were not detected. Out of the 60 isolates of EAEC (AA) (25% aat+ by PCR and 35% by hybridization) the aggregative adherence fimbriae were observed at low frequency (aggA-1.7%, aafA-0%, agg3A-11.7%, hda-8.3%). Typical EAEC were 31.7% of the EAEC isolates (aggR+), and among these, biofilm formation, score 3+ in clump test and the presence of aat, agg3A, hda, aap, sat, pet, iucA and set1A were significant. CLA isolates (87.5%) possessed the pet gene, all were aggR- and were clump test+, and no one was biofilm forming. Among the 42 isolates of DAEC (DA), the probe detected DAAC 52.4%. PCR showed adhesin afa/Dr (daad+/afa+) in 59.5% and AIDA-I adhesin was not found, suggesting that other adhesins are involved in DAEC adhesion. afa/Dr DAEC isolates were significant among <5 years. In aEPEC, the genes of pathogenicity island OI-122 (nleE, efa1/lifA and paa) and were seen in 30% all from <5 years. Virulence characteristics of tEAEC and DAEC Afa/Dr suggest that subpopulations are related diarrhea. CLA does not appear to be a EAEC variant.
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/1339
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