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Title: Propagação in vitro e determinação do número cromossômico de Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult.
metadata.dc.creator: Spadeto, Micheli Sossai
Keywords: Myrsine;Citogenética;Citometria de fluxo;Embriogênese somática
Issue Date: 27-Feb-2015
Publisher: Universidade Federal do Espírito Santo
Abstract: As técnicas de cultura de tecidos in vitro podem gerar subsídios à propagação e manutenção do germoplasma de espécies florestais de interesse, como Myrsine coriacea (Sw.) R.Br. ex Roem. & Schult. (Primulaceae). Essa espécie vem se destacando na indústria farmacêutica por produzir substâncias como o ácido mirsinóico B, de efeito antinociceptivo e a proteína lectina, com ação potencial na cura do câncer. Além disso, o estabelecimento in vitro de M. coriacea, é importante no fornecimento de material vegetal (folhas e raízes) para análises citogenéticas e de citometria de fluxo, que podem ser utilizadas para a caracterização cariotípica da espécie. Com base no exposto, o presente trabalho teve como objetivos: estabelecer um protocolo de propagação in vitro para M. coriacea, mensurar o conteúdo de DNA nuclear e determinar o número cromossômico dessa espécie. Desse modo, plântulas de M. coriacea foram obtidas por duas vias de propagação in vitro: germinação de sementes maduras e regeneração a partir de embriões zigóticos imaturos. A maior frequência de germinação (100%) foi observada para sementes previamente tratadas com HCl 10% e inoculadas em meio MS suplementado com 10.74 µM de ácido giberélico, no qual, as primeiras plântulas foram geradas após 41 dias de cultivo. Na embriogênese somática, utilizando embriões zigóticos imaturos, calos friáveis e embriões somáticos foram obtidos em meio MS suplementado com 4.44 µM de 6-benzilaminopurina, sendo que as plântulas foram regeneradas após 120 dias de cultivo. Folhas e raízes das plântulas obtidas in vitro foram utilizadas nas análises de citometria de fluxo, as quais revelaram uma variação intraespecífica no conteúdo de DNA nuclear de M. coriacea. Tal variação se confirmou nas análises citogenéticas, onde alguns indivíduos apresentaram 2n = 45 e outros 2n = 46 cromossomos. Tendo em vista a dioicia em M. coriacea, os dados sugerem que essa variação esteja relacionada à presença de cromossomos sexuais. Além disso, grupos de pares de cromossomos morfologicamente idênticos também foram observados indicando uma possível origem poliploide da espécie. Os resultados obtidos nesse estudo contribuem com estudos sobre determinação do sistema sexual, evolução e cultivo in vitro do gênero Myrsine.
In vitro tissue culture techniques can generate subsidies for the propagation and germplasm maintenance of forest species of interest such as Myrsine coriacea (Sw.) R. Br. Ex Roem. & Schult. (Primulaceae). This species has been highlighted in the pharmaceutical industry for producing substances like mirsinoic acid B, showing analgesic effects, and the lectin protein, with potential câncer - healing action. Thus, the establishment and in vitro culture of M. cor iacea is a potential alternative for the production of these substances and the generation of seedlings for reforestation programs. Besides the economic relevance, M. coriacea is a dioecious species with male and female representatives clearly defined in the reproductive period. Based on the above, this study aimed to establish a protocol for in vitro propagation of M. coriacea, measure the nuclear DNA content and determine the chromosome number of the species. M. coriacea seedlings were obtained by in vitro propagation thro ugh two routes: mature seed germination and regeneration from immature zygotic embryos. The highest frequency of germination (100%) was observed for seeds previously treated with 10% HCl and inoculated in medium MS (Murashige and Skoog) supplemented with 10.74 mM of gibberellic acid, in which the first seedlings were generated after 41 days of culture. In somatic embryogenesis using immature zygotic embryos, friable calli and somatic embryos were obtained in medium MS s upplemented with 4.44 μM of 6 - benzylaminopurine, and the plantlets were regenerated after 120 days of cultivation. Leaves and roots of the seedlings obtained in vitro were used in flow cytometric analysis, which revealed an intraspecific variation in nucle ar DNA content in M. coriacea. This variation was confirmed by cytogenetic analysis, xv where some individuals showed 2n = 45 and others 2n = 46 chromosomes. Given the dioecy of M. coriacea, the data suggest that this variation is related to the presence of sex chromosomes. Furthermore , groups of morphologically identical chromosome pairs were also observed indicating a possible polyploidy origin of the specie. The establishment of the in vitro culture protocol for M. coriacea enabled the mass propagation of the species and is useful for the large - scale production of plants with reduced time and space. The flow cytometry and cytogenetic data showed for the first time that the male and female individuals of M. coriacea differ in DNA content and chromosome number
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/4851
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