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Title: Desempenho da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania (Leishmania) amazonensis, por citometria de fluxo, no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana
metadata.dc.creator: Pissinate, Jauber Fornaciari
Keywords: LTA;citometria;diagnóstico;IgG
Issue Date: 31-Aug-2006
Publisher: Universidade Federal do Espírito Santo
Citation: PISSINATE, Jauber Fornaciari. Desempenho da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania (Leishmania) amazonensis, por citometria de fluxo, no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana. 2006. 72 f. Dissertação (Mestrado em Mestrado em Doenças Infecciosas) - Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2006.
Abstract: In this work, the performance of a cytometry-based methodology to detect anti-L.(L.) amazonensis antibodies was analyzed for the diagnosis for American tegumentar leishmaniasis (ATL). As a first step, we have standardized the methodology which allowed the discrimination between patients with ATL and healthy individuals. Then, we analyzed sera from 69 patients with parasitological diagnosis for ATL (59 from cutaneous and 10 from mucosal leishmaniasis) to evaluate the performance of the methodology in diagnosing ATL. As control, sera from 34 healthy individuals and 50 patients with visceral leishmaniasis (VL), Chagas disease (CD), malária (MAL), hanseniasis (HAN) and sporotrichosis (SPO) were also assessed. Diluted sera samples were first incubated with fixed promastigote and then, with FITC conjugated anti-human IgG diluted at 1:4,000 for flow cytometry analysis. The results were expressed as percentage of positive fluorescent parasites (PPFP) for each individual sample, establishing PPFP = 25% as the cut-off between positive and negatives results. The analysis of the test performance demonstrated sensibility of 99% and specificity of 100%, when only sera from healthy individuals were considered as control. However, a decrease on the specificity (from 100% to 70%) was observed when sera from VL, CD and MAL were evaluated. Due to this cross-reaction, the performance of the test using IgG subclasses was evaluated in the diagnosis of ATL. Concerning IgG subclasses, reactivity was found only for IgG1 and IgG3. The comparative analysis of the test performance using IgG, IgG1 and IgG3 showed sensibility of 96%, 88% and 100% and specificity of 54,5%, 63% and 65% , respectively, when sera from VL, CD and MAL were analyzed. Based on our results we can conclude that this methodology can be used as an alternative tool for the diagnosis of ATL.
O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho da pesquisa de anticorpos anti-L. (L.) amazonensis, por citometria de fluxo, no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA). Inicialmente, foi realizada a padronização do método, a partir da qual foram estabelecidas as condições que permitiram discriminar entre a reatividade de IgG de pacientes portadores de LTA e de indivíduos saudáveis. Posteriormente, para avaliar a aplicabilidade e o desempenho da metodologia no diagnóstico da LTA, foram utilizados soros de 69 pacientes com diagnóstico sorológico positivo para LTA, sendo 59 de pacientes com leishmaniose cutânea e 10 com leishmaniose mucosa. Como controles, foram também avaliados 34 soros de indivíduos saudáveis e 50 soros de pacientes portadores de diferentes doenças infecciosas, incluindo leishmaniose visceral (LV), doença de Chagas (DC), malária (MAL), hanseníase (HAN) e esporotricose (ESP). As amostras de soro diluídas foram incubadas com promastigotas fixadas de L. (L.) amazonensis, posteriormente incubadas com anti-IgG humano marcado com FITC diluído 1:4.000 e analisadas no citômetro de fluxo. Os resultados foram expressos como o percentual de parasitos fluorescentes positivos (PPFP) para cada amostra individual, estabelecendo PPFP=25% como ponto de corte entre pacientes com LTA e indivíduos saudáveis. A análise do desempenho do teste mostrou sensibilidade de 99% e especificidade de 100% quando foram avaliados como controles apenas soros de indivíduos saudáveis. Entretanto, a análise do teste com soros de pacientes com LV, DC e MAL mostrou uma alta reatividade cruzada com essas infecções, causando uma queda dos índices de especificidade de 100% para 70%. Devido a essa reatividade cruzada, foi avaliado o desempenho da pesquisa de subclasses de IgG no diagnóstico da LTA. Com relação às subclasses de IgG, foi encontrada reatividade significante apenas para IgG1 e IgG3. A análise comparativa do desempenho da metodologia para a pesquisa de IgG, IgG1 e IgG3 mostrou sensibilidade de 96%, 88% e 100%, e especificidade de 54,5%, 63% e 65%, respectivamente, quando no grupo controle foram incluídos soros de pacientes com LV, DC e MAL. Com base nesses dados, podemos concluir que essa metodologia pode ser utilizada como ferramenta alternativa para o diagnóstico da LTA.
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/5891
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