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Title: Genótipos de rotavírus do grupo A de crianças com diarréia aguda atendidas em dois hospitais do município de Vitória ES, em período anterior à imunização para rotavirus
metadata.dc.creator: Saick, Ketene Werneck
Keywords: Gastroenterite;Crianças;Rotavírus;Reação em cadeia de polimerase;Genotipagem
Issue Date: 17-Sep-2007
Publisher: Universidade Federal do Espírito Santo
Citation: SAICK, Ketene Werneck. Genótipos de rotavírus do grupo A de crianças com diarréia aguda atendidas em dois hospitais do município de Vitória ES, em período anterior à imunização para rotavirus. 2007. 124 f. Dissertação (Mestrado em Mestrado em Doenças Infecciosas) - Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2007.
Abstract: Os rotavirus do grupo A (RVA) são uma das principais causas de diarréia aguda em crianças até cinco anos tanto em países desenvolvidos como em desenvolvimento. O virion possui genoma constituído por 11 segmentos de RNAdf, contido por um triplo capsídeo concêntrico, cujo padrão de migração após eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) permite a classificação em grupos (A-G) e em perfis longo, curto e super-curto. O capsídeo externo é formado pelas proteínas VP4 e VP7, cujos genes formam a base do sistema de classificação em genótipos P e G, respectivamente. O conhecimento dos genótipos de RVA em uma determinada área geográfica é essencial para o estabelecimento e o monitoramento de estratégias preventivas. Considerando a carência de estudo de genotipagem no Espírito Santo, esta pesquisa se propôs: i) determinar os genótipos de RVA obtidos de crianças com diarréia aguda, residentes na Região Metropolitana de Vitória - ES, provenientes do Pronto Socorro do Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (PS-HINSG) (80/253), entre fevereiro de 2003 e junho de 2004 e; ii) determinar a freqüência e os genótipos de RVA em crianças atendidas na emergência (n=5) ou hospitalizadas (n=63) na pediatria do Hospital CIAS-UNIMED, entre julho de 2004 e novembro de 2006. RNAdf viral foi extraído a partir de suspensão fecal, através do método de guanidina-sílica. EGPA foi realizado nas amostras do CIAS/UNIMED para detecção de RVs e determinação do perfil eletroforético. DNA complementar foi sintetizado por transcrição reversa utilizando o iniciador randômico pdN6 TM. PCR foi realizado utilizando um par de iniciadores consenso para VP4 (4con2/4con3) ou para VP7 (9con1/9con2) e os produtos foram utilizados na Multiplex semi-nested PCR com iniciadores específicos para G e P (G1-G5, G9, P[4], P[6], P[8], P[9]). Das cepas de RVA do PS-HINSG, observou-se os genótipos G1P[8] (83,6%), G9P[8] (7,5%), G1P[4] (2,5%), G1P[6] (1,3%), G4P[6] (1,3%) e G?P[8] (3,8%). Das amostras obtidas no CIAS/UNIMED, 20,6% (14/68) foram positivas para RVA, quatro e dez com perfis curto e longo, respectivamente. Destas cepas, foram observados os genótipos G9P[8] (50%), G2P[4] (28,7%), G2P[8], G1P[8] e G?P[8] (7,1%, cada). Nenhuma infecção mista foi observada em ambos hospitais. Estes dados revelam: i) G1P[8] e G9P[8], genótipos prevalentes no PS-HINSG e no CIAS/UNIMED, espectivamente; ii) G9P[8], detectado no final do período de coleta das amostras do PS-HINSG, sugere flutuação temporal na circulação; iii) G2P[4], encontrado somente em 2006 nas crianças hospitalizadas. Os resultados obtidos sugerem que a vacina Rotarix® utilizada no Brasil poderá ser eficiente em reduzir o número de casos e a gravidade da doença na região do estudo. Entretanto, destaca-se o surgimento do genótipo G2 para o qual a vacina apresenta menor proteção, reforçando a necessidade de vigilância contínua dos genótipos circulantes como monitoramento da eficácia da vacina.
Group A rotaviruses (RVA) are a major cause of acute diarrhea in children up to 5 years in both developing and developed countries. The virion consists of 11 double-stranded RNA (dsRNA) genome enclosed in a triple-shelled capsid, which migration pattern in polyacrilamide gel eletrophoresis (PAGE) permit the classification in groups (A-G) and in long, short and super-short profiles. The outer shell is composed by VP4 and VP7 proteins which genes form the basis of the classification system in P and G genotypes, respectively. The knowledge about RVA genotypes distribution is essential for the establishment and the monitoring of preventive strategies. Considering the lack of these studies in Espírito Santo State, this investigation proposed: i) to determine RVA genotypes obtained from children with acute diarrhea, resident in Metropolitan region of Vitória - ES, from the Emergency Room at Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG) (80/253), collected between February 2003 and June 2004 and; ii) to determine the frequency and RVA genotypes in children attended at Emergency (n=5) or hospitalized (n=63) from Pediatric Setor of CIAS/UNIMED hospital, between July 2004 and November 2006. dsRNA were extracted from fecal suspensions by guanidine-silica procedure. PAGE was performed in CIAS/UNIMED samples for rotaviruses detection and eletropherotype determination. Complementary DNA was obtained by reverse transcription with pdN6 TM random primer. PCR were done with a pair of consensus primers for VP4 (4con2/4con3) or VP7 (9con1/9con2) and the products were submitted to Multiplex semi-nested PCR with specific primers for the G and P types (G1-G5, G9, P[4], P[6], P[8], P[9]). RVA genotypes observed from HINSG were G1P[8] (83.6%), G9P[8] (7.5%), G1P[4] (2.5%), G1[6] (1.3%), G4P[6] (1.3%) and G?P[8] (3.8%). Among samples stools from CIAS/UNIMED, 20.6% (14/68) were RVA positive, four and ten with short and long eletropherotypes, respectively. The following genotypes were observed: G9P[8] (50%), G2P[4] (28.7%), G2P[8], G1P[8] and G?P[8] (7%, each). No mixed infection was observed in both hospitals. These data reveal: i) G1P[8] and G9P[8] were the most common genotypes from HISNG and CIAS/UNIMED, respectively; ii) G9P[8] was detected in the end of the samples obtainment, suggesting temporal fluctuation on genotype circulation; iii) G2P[4] was found only in 2006 from hospitalized children. The results suggest that RotarixTM vaccine used in Brazil may efficiently reduce the severity and the number of RVA cases in the region studied. However, it must be emphasize the emergence of G2 type for which the vaccine shows lower protection, reforcing the need of continuous surveillance of RVA genotypes as vaccine efficacy monitoring.
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/5899
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