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Título: Efeito do alto sódio no fenótipo migratório de células musculares lisas vasculares de aorta de ratos
Autor(es): Brun, Bruna Ferro
Orientador: Vassallo, Paula Frizera
Coorientador: Barauna, Valério Garrone
Data do documento: 15-Set-2017
Editor: Universidade Federal do Espírito Santo
Citação: BRUN, Bruna Ferro. Efeito do alto sódio no fenótipo migratório de células musculares lisas vasculares de aorta de ratos. 2017. 89 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Fisiológicas) - Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.
Resumo: INTRODUÇÃO: No sistema cardiovascular, a migração de células musculares lisas vasculares (CMLVs) é fundamental em processos como, angiogênese, vasculogênese, e como resposta a injúrias participando do processo de remodelamento vascular. O aumento da concentração de sódio (AS) tem sido associado ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares, independente do aumento da pressão arterial. Entretanto, pouco ainda se sabe sobre os efeitos do AS sobre a migração de CMLVs e os possíveis mecanismos envolvidos. OBJETIVO: Testar a hipótese de que o aumento da concentração de sódio pode induzir modificações no fenótipo migratório de células musculares lisas vasculares e avaliar os possíveis mecanismos moleculares que possam estar envolvidos neste processo. METODOLOGIA: Células musculares lisas vasculares primárias, obtidas pelo método de explante, foram utilizadas neste estudo. A migração celular foi avaliada pelo método de Wound-Healing nas condições: Alto Sódio (AS, NaCl:160mM) e Controle (CT, NaCl:140mM) e foram utilizados os fármacos: Candesartan, Enalapril, Tiron, Angiotensina II, NS398, Apocinina, SQ29548, U46619, CAY10441 e U0126 (N= 5 a 7). A viabilidade celular foi avaliada pela marcação com Anexina V e PI. A expressão gênica de ciclooxigenase 2 (COX-2) foi analisada pelo RT-PCR. A expressão proteica de ERK 1/2 fosforilada foi avaliada através da técnica de Western Blot. RESULTADOS: A pré-exposição ao AS reduziu a migração de CMLVs (CT: 100 ± 14% / AS: 58 ± 11%), sem alterar a viabilidade celular. O bloqueio do receptor AT1, com Candesartan, preveniu a ação do AS sobre a migração celular (*AS + Candesartan: 101 ± 10%), bem como o bloqueio da ECA pelo Enalapril (*AS + Enalapril: 97 ± 5%). O bloqueio de COX-2, com NS398, também preveniu a redução de migração celular pelo AS (*AS + NS398: 96 ± 7%) O bloqueio de ERK1/2, com U0126 também reverteu a ação do AS (*AS + U0126: 99 ± 5%), bem como o bloqueio do receptor de tromboxano com SQ29548 (*AS + SQ29548: 94 ± 10%). AS aumentou a expressão gênica da ciclooxigenase 2 (COX-2) e a fosforilação de ERK1/2 em CMLVs, sendo que o bloqueio do receptor AT1 foi capaz de normalizar a expressão de COX-2 e prevenir o aumento da fosforilação de ERK 1/2. Finalmente, o inibidor da quinase MEK 1/2 preveniu o aumento da expressão gênica de COX-2. CONCLUSÃO: O estudo demonstrou que o AS reduz a migração de células musculares lisas vasculares, através do aumento da expressão de COX-2 via receptor AT1 através da fosforilação de ERK 1/2. Além disso, o aumento de COX-2 pelo AS parece modular a redução de migração de CMLVs pelo aumento de tromboxano.
INTRODUCTION: In the cardiovascular system, the migration of vascular smooth muscle cell migration (VSMC) is fundamental in processes such as angiogenesis, vasculogenesis, and in response to injuries in the process of vascular remodeling. High sodium (HS) has been associated with the development of cardiovascular diseases, regardless the increase in blood pressure. However, little is known about their effects in migration of VSMCs and the possible mechanisms involved. OBJECTIVE: To test the hypothesis that high sodium concentration can induce phenotypic changes in VSMCs and to evaluate the molecular mechanisms that may be involved in this process. METHODS: Primary vascular smooth muscle cells were obtained by the explant method. Cellular migration was evaluated by the Wound-Healing method under the conditions: High Sodium (AS, NaCl: 160 mM) and Control (CT, NaCl: 140 mM) and the following drugs were used: Candesartan, Enalapril, Tiron, Angiotensin II, NS398, Apocinin, SQ29548, U46619, CAY10441 and U0126 (N = 5 to 7). Cell viability was assessed by Annexin V and PI labeling. The gene expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) was analyzed by RT-PCR. Protein expression of phosphorylated ERK 1/2 was assessed by the Western Blot. RESULTS: Pre-exposure of CMLVs to HS reduced migration (CT: 100 ± 14% / HS: 58 ± 11%), without modifying cellular viability. Blocking of the AT1 receptor with Candesartan prevented the action of HS in cell migration (* HS + Candesartan: 101 ± 10%), as well as the blockade of ACE by Enalapril (* HS + Enalapril: 97 ± 5%). Blockade of COX-2 with NS398 also prevented the action of HS (* HS + NS398: 96 ± 7%). Blocking of ERK 1/2 with U0126 also reversed the action of HS (* HS + U0126: 99 ± 5%), as well as the thromboxane receptor blockade with SQ29548 (* HS + SQ29548: 94 ± 10%). HS increased the gene expression of COX-2 and ERK1 / 2 phosphorylation. AT1 receptor blockade normalized COX-2 gene expression and prevented the increase of ERK 1/2 phosphorylation. Inhibitor of the MEK 1/2 prevented the increase of COX-2 gene expression. CONCLUSION: The study demonstrated that HS reduces the migration of vascular smooth muscle cells by increasing COX-2 expression via the AT1 receptor through ERK 1/2 phosphorylation. In addition, the increase of COX-2 by HS seems to modulate the reduction of migration of VSMCs by the increase of thromboxane.
URI: http://repositorio.ufes.br/handle/10/7906
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