Metodização do isolamento e análise do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das populações ressuscitáveis e metabolicamente ativas de Mycobacterium tuberculosis

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dc.contributor.advisor-co1Almeida Júnior, Pedro Sousa de
dc.contributor.advisor-co1IDhttps://orcid.org/0000-0002-8977-6141
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9774221817421517
dc.contributor.advisor1Palaci, Moisés
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000000320136071
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2602694352713051
dc.contributor.authorBrunetti, Manuela Negrelli
dc.contributor.authorIDhttps://orcid.org/0000-0002-2139-2889
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/9382497302950043
dc.contributor.referee1Santos, Kênia Valéria dos
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/0000-0001-6871-3128
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9074173162086323
dc.contributor.referee2Ferrazoli, Lucilaine
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/0000-0002-5389-7056
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/8786839834967611
dc.date.accessioned2024-05-30T00:49:46Z
dc.date.available2024-05-30T00:49:46Z
dc.date.issued2021-07-29
dc.description.abstractAn effective antimicrobial therapy is one of the biggest challenges in combating Tuberculosis (TB), since therapeutic failures can happen for several reasons. The bacillus that causes the disease can be found in different metabolic states in sputum samples from patients with TB, and it has been demonstrated that these bacilli in dormant states are more tolerant to some drugs and are not visualized by conventional diagnostic methods, which may justify eventual therapeutic failures for no apparent reason. This study aimed to assess whether the antimicrobial susceptibility profile of the total population (resuscitable + active) of Mycobacterium tuberculosis, isolated from sputum samples from patients with pulmonary TB, differs from the profile of the metabolically active population. The study was divided into two stages. The first consisted of standardizing the obtainment of the total population of bacilli by using a culture medium with MTB liquid culture supernatant filtrate (SN), and standardizing the Antimicrobial Susceptibility Test (AST) by the broth microdilution method. The second stage tested standardized methods for obtaining the total bacterial population using sputum samples from patients with pulmonary TB and followed by performing AST on these samples. Our results showed that the 7H9 liquid culture medium added with SN was superior to the others tested in relation to the recovery of resuscitable bacilli and with sufficient bacterial concentration to carry out the AST directly. However, due to the high contamination rate of this medium, the indirect method was used to obtain MTB populations, before the AST. The addition of SN to the 7H9 liquid growth medium has been shown to decrease the positivity time by up to 1.5 days. The use of Optical Density as a growth detection tool in liquid culture was shown to be inferior to the automated system, not having any correlation with bacterial growth. Additionally, our results showed that the washing and freezing step seems to reduce the inhibitory factors present in the sputum, by decreasing the growth inhibition rate after freezing the samples, however, it does not eliminate them. The use of SN has shown, in tests with reference strain, that it accelerates the growth of active MTB, but does not alter bacterial quantification by the Most Probable Number (MPN) technique. The AST with the total population of bacilli, although presenting higher MIC values more frequently, does not imply changes in sensitivity and resistance in the population of patients without previous treatment for pulmonary TB. Nevertheless, our results suggest that the susceptibility profile of the total population of bacilli compared to the active population, of the only case of a patient under treatment included in this study, showed possibly different sensitivity/resistance patterns in this population of patients, suggesting the need for new studies involving patients undergoing treatment with suspected resistance, therapeutic failure or relapse.
dc.description.resumoUma terapia antimicrobiana eficaz constitui um dos maiores desafios no combate à Tuberculose (TB), visto que falhas terapêuticas podem acontecer por diversos motivos. O bacilo causador da doença pode ser encontrado em diversos estados metabólicos em amostras de escarro de pacientes com TB, sendo demonstrado que esses bacilos em estados dormentes são mais tolerantes a algumas drogas e não são visualizados pelos métodos convencionais de diagnóstico, podendo justificar eventuais falhas terapêuticas sem motivo aparente. Esse estudo se propôs a avaliar se o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos da população total (ressuscitável + ativa) de Mycobacterium tuberculosis, isolado de amostras de escarro de pacientes com TB pulmonar se difere do perfil da população metabolicamente ativa. O estudo foi dividido em duas etapas. A primeira consistiu na padronização da obtenção da população total de bacilos por meio da utilização de meio de cultura contendo sobrenadante de cultura líquida de MTB (SN), e da padronização do Teste de Suscetibilidade aos Antimicrobianos (TSA) pelo método de microdiluição em caldo. A segunda etapa testou os métodos padronizados para a obtenção da população total de bactérias utilizando amostras de escarro de pacientes com TB pulmonar e seguindo com a realização do TSA nessas amostras. Nossos resultados mostraram que o meio de cultura líquido 7H9 acrescido de SN foi superior aos demais testados com relação à recuperação de bacilos ressuscitáveis e, com concentração bacteriana suficiente para a realização do TSA de forma direta. Porém, devido à alta taxa de contaminação desse meio, o método indireto foi empregado para a obtenção das populações de MTB, antes do TSA. A adição de SN ao meio de crescimento líquido 7H9, mostrou diminuir o tempo de positivação em até 1,5 dias. O uso da Densidade Ótica como ferramenta de detecção de crescimento em cultura líquida, mostrou-se ser inferior ao sistema automatizado, não possuindo correlação com o crescimento bacteriano. Adicionalmente, nossos resultados mostraram que a etapa de lavagem e o congelamento parece diminuir os fatores inibidores presentes no escarro, através da diminuição da taxa de inibição de crescimento após o congelamento das amostras, porém, não elimina. O uso de SN mostrou, em testes com cepa de referência, que acelera o crescimento de MTB ativa, mas não altera a quantificação bacteriana pela técnica de Número Mais Provável (NMP). O TSA com a população total de bacilos embora apresente valores superiores de CIM em maior frequência não implica na alteração de sensibilidade e resistência na população de pacientes sem tratamento prévio para TB pulmonar. Apesar disso, nossos resultados sugerem que o perfil de suscetibilidade da população total de bacilos comparada à população ativa, do único caso de paciente em tratamento incluído nesse estudo, evidenciou padrões de sensibilidade/resistência possivelmente diferentes nessa população de pacientes, sugerindo a necessidade de novos estudos envolvendo pacientes em tratamento, com suspeita de resistência, falha terapêutica ou recidiva.
dc.description.sponsorshipFundação Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/14966
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Doenças Infecciosas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Doenças Infecciosas
dc.rightsopen access
dc.subjectTuberculose
dc.subjectMycobacterium tuberculosis
dc.subjectdormência
dc.subjectteste de sensibilidade aos antimicrobianos
dc.subject.br-rjbnsubject.br-rjbn
dc.subject.cnpqDoenças Infecciosas e Parasitárias
dc.titleMetodização do isolamento e análise do perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das populações ressuscitáveis e metabolicamente ativas de Mycobacterium tuberculosis
dc.title.alternativetitle.alternative
dc.typemasterThesis
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