Análise temporal da função renal em camundongos hipercolesterolêmicos

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dc.contributor.advisor-co1Gava, Agata Lages
dc.contributor.advisor1Meyrelles, Silvana dos Santos
dc.contributor.authorBalarini, Camille de Moura
dc.contributor.referee1Stefanon, Ivanita
dc.contributor.referee2Pereira, Thiago de Melo Costa
dc.date.accessioned2018-08-01T22:58:34Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T22:58:34Z
dc.date.issued2009-10-02
dc.description.abstractAging is a physiological process with deleterious consequences for renal function, which could be exacerbated when concurrent with pathological situations, such as dyslipidemia. The aim of this study was to determine whether hypercholesterolemia and aging could affect the renal function in mice. Male hypercholesterolemic apolipoprotein E-deficient (ApoE, n=18) mice and their age-matched C57BL/6 (C57, n=18) control mice were studied at 2-, 4- and 8-month-old. At each time point, animals were placed in metabolic cages for 24 hours in order to analyze urine volume and urinary creatinine determination. Samples of blood were collected for serum cholesterol, urea and creatinine determination. Glomerular filtration rate (GFR) was estimated by the creatinine clearance. Urine samples were submitted to polyacrilamide gel electrophoresis to verify the presence of albuminuria and renal senescence was evaluated by senescence associated beta-galactosidase activity technique. Glomerular morphometric measurements were evaluated in 10 hematoxilin-eosin stained sections (10 µm-thickness) and mesangial expansion was evaluated by Periodic Acid Schiff staining. Expression of nNOS was measured by Western Blotting. For statistical analysis, 2-way ANOVA was used followed by Fisher’s post hoc. Differences were considered statistically significant when p<0.05. Total plasma cholesterol was increased about 5-fold in ApoE mice at both time points compared with C57 animals (C57 2 months: 94.0±5.1; ApoE 2 months: 606.0±91.3; C57 4 months: 97.1±7.2; ApoE 4 months: 493.7±44.0; C57 8 months: 116.0±10.0 and ApoE 8 months: 636.1±76.4). At 2-month-old, GFR was already markedly reduced in ApoE (187±28) when compared to C57 mice (358±92). Aging caused a significant reduction of GFR in C57 mice (4 months: 211±60 and 8 months: 81±14) although did not worse this parameter in ApoE mice (4 months: 128±42 and 8 months: 93±18). In addition, serum urea was significantly increased in ApoE animals already at 2-month-old compared with C57 mice and this difference is not time-dependent (C57 2 months: 39.8±5.2; ApoE 2 months: 64.5±7.6; C57 4 months: 41.1±7.8; ApoE 4 months: 73.5±17.9; C57 8 months: 49.1±3.5; ApoE 8 months: 77.3±7.5). Only ApoE mice at 8-montold presented albuminuria. Aging promoted markedly renal senescence in C57 animals and this occurred earlier in ApoE. No differences were found in glomeruli number nor glomerular tuft area. A significant mesangial expansion was already observed at 2-month-old ApoE mice (ApoE: 35.3±0.8 vs. C57: 29.8±0.9) and this condition was aggravated by aging in ApoE mice (4 months: 40.4±1.2 and 8 months: 41.5±2.7) and induced in age-matched C57 animals (4 months: 37.8±1.3 and 8 months: 37.4±0.7). No differences were found in nNOS expression due to neither aging nor hypercholesterolemia. These data show that hypercholesterolemia can enhance the age-related loss of renal function.eng
dc.description.resumoO envelhecimento é um processo fisiológico que apresenta conseqüências deletérias para a função renal, as quais podem ser exacerbadas na presença de co-morbidades, como a dislipidemia. Portanto, o objetivo do presente estudo foi determinar o papel da hipercolesterolemia e do processo de envelhecimento na função renal de murinos. Camundongos machos espontaneamente hipercolesterolêmicos deficientes de apolipoproteína E (ApoE, n=18) e seus respectivos controles C57BL/6 (C57, n=18) de mesma idade foram estudados aos 2, 4 e 8 meses de idade. Em cada um destes momentos, os animais foram alocados em gaiolas metabólicas por 24 horas para aferição do volume urinário e determinação de creatinina urinária. Amostras de sangue foram coletadas para a determinação de colesterol, uréia e creatinina no plasma. A taxa de filtração glomerular (TFG) foi estimada através da depuração de creatinina. Amostras de urina foram submetidas à eletroforese em gel de poliacrilamida para verificação da ocorrência de albuminúria e a senescência renal foi avaliada pela técnica de senescência associada à atividade da betagalactosidase. Medidas morfométricas glomerulares foram avaliadas em 10 cortes (10 µm) corados com hematoxilina-eosina e a expansão mesangial foi verificada pela coloração com Ácido Periódico de Schiff. A expressão da enzima nNOS foi avaliada através de Western Blotting. Para análise estatística foi realizada ANOVA de 2 vias, seguida pelo post hoc de Fisher. As diferenças foram consideradas estatisticamente significantes quando p<0,05. O colesterol plasmático total mostrou-se elevado aproximadamente 5 vezes nos animais ApoE em todas as idades, comparados aos respectivos controles C57 (C57 2 meses: 94,0±5,1; ApoE 2 meses: 606,0±91,3; C57 4 meses: 97,1±7,2; ApoE 4 meses: 493,7±44,0; C57 8 meses: 116,0±10,0 e ApoE 8 meses: 636,1±76,4). Aos 2 meses, a TFG já se mostrou significativamente reduzida nos animais ApoE (187±28) comparados aos camundongos C57 (358±92). O incremento da idade promoveu significativa redução da TFG em camundongos C57 (4 meses: 211±60 e 8 meses: 81±14) mas não piorou este parâmetro nos animais ApoE (4 meses: 128±42 e 8 meses: 93±18). Em adição, os níveis séricos de uréia mostraram-se elevados nos animais ApoE já aos 2 meses de idade e este parâmetro não varia em função do curso temporal (C57 2 meses: 39,8±5,2; ApoE 2 meses: 64,5±7,6; C57 4 meses: 41,1±7,8; ApoE 4 meses: 73,5±17,9; C57 8 meses: 49,1±3,5; ApoE 8 meses: 77,3±7,5). Somente os animais ApoE aos 8 meses apresentam albuminúria. O curso temporal leva à senescência renal, que é precoce em animais hipercolesterolêmicos. Nenhuma diferença foi encontrada no número de glomérulos e na área do tufo glomerular. Significante expansão mesangial foi observada nos camundongos ApoE já aos 2 meses de idade (ApoE: 35,3±0,8 vs. C57: 29,8±0,9) e esta condição foi temporalmente agravada neste animais (4 meses: 40,4±1,2 e 8 meses: 41,5±2,7) e induzida nos controles C57 (4 meses: 37,8±1,3 e 8 meses: 37,4±0,7). Não foram observadas alterações significativas na expressão da enzima nNOS. Estes achados demonstram que a hipercolesterolemia é capaz de exacerbar a perda de função renal decorrente do processo de envelhecimento.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/7937
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Ciências Fisiológicas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas
dc.rightsopen access
dc.subject.cnpqFisiologia
dc.subject.udc61
dc.titleAnálise temporal da função renal em camundongos hipercolesterolêmicos
dc.typemasterThesis
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