Avaliação do efeito do agonista do receptor de estrogênio acoplado a proteína g (g1) sobre o tônus e reatividade vascular coronariana em ratos normotensos de ambos os sexos

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dc.contributor.advisor-co1Moyses, Margareth Ribeiro
dc.contributor.advisor1Santos, Roger Lyrio dos
dc.contributor.authorDebortoli, Angelina Rafaela
dc.contributor.referee1Bendhack, Lusiane Maria
dc.contributor.referee2Bissoli, Nazaré Souza
dc.date.accessioned2018-08-01T22:58:49Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T22:58:49Z
dc.date.issued2015-07-24
dc.description.abstractCardiovascular diseases represent the main cause of death in developed countries. Moreover, the incidence of cardiovascular diseases increases significantly in postmenopausal women, possibly because of a reduction of estrogen levels. Estrogens exert their genomic effects by activating their nuclear receptors α e β, besides no genomic effects via activation of a third estrogen receptor, recently released, named estrogen receptor coupled to protein G (GPER), also known as GPR30. The GPER function were described mainly in the cardiovascular system. Some studies in isolated coronary vessels, demonstrate that the GPER activation, promotes dependently or independently, the vasodilatationin the endothelium. However, in the coronary bed, this receptor role was not described. The aim of our work was to analyze the action of G1, the specific agonist of GPER in both sexes of normotensive rats‟ coronary vascular bed. 10-month-old Wistar Rats, were divided into two groups: males and females. The animals were anesthetized, their chests were opened, their hearts were removed, and rapidly perfused with nourishing solution at 37º C with constant flow of 10 mL/min, according to Langendorff‟s technique. After a period of 40 min of stabilization, the pressure of coronary perfusion was determined. Dose response curve G1 (600 a 10.000 nM) was performed before and after the follow protocols: inhibition of the nitric oxide synthase enzyme (NOS) with L NAME, inhibition of cyclooxygenase enzyme (COX), inhibition of cytochrome enzyme P450 (CYP), associated inhibition of NOS and COX, associates inhibition of NOS and CYP, triple inhibition of NOS, COX and CYP, blockade of potassium channels with tetraethylammonium (TEA) and blockade with GPER specific antagonist (G36). Besides these protocols, the animals‟ systolic blood pressure was measured through tail plethysmography. We also dissected their anterior and septal descending coronaries to perform Western Blotting in order to evaluate the GPER expression, antioxidant enzymes (SOD e catalase) and subunit of NADPH oxidase. Oxidative stress in coronary arteries was evaluated through fluorescence to the DHE. Our results show the existence of a difference in PAS and PPC between males and females. PAS was higher in males while PPC was higher in females. G1 promoted vasodilatation in rats‟ coronary bed in both sexes, being this response more pronounced in females. GPER, SOD and catalase expression was similar in both groups. Whereas gp91phox expression and oxidative stress were larger in males. The dilatation to G1 in females was reduced after individual inhibition of NOS, COX and CYP, after combined inhibition of NOS + CYP and after triple inhibition of NOS + COX + CYP. Using G36 in experimental preparation, the vasodilatation in this group was reverted into vasoconstriction. After using TEA, dilatation in males and females was larger. Relaxation was reduced in males after individual inhibition of COX and CYP and after combined inhibition of NOS + COX. The use of G36 abolished relaxation in this group. Based on the results, we concluded that G1 expanded the Wistar rats coronary vascular bed in both sexes and this response is less pronounced in males, probably because in this group the production of reactive species of oxygen is larger. Furthermore, NO does not participate in the response of relaxation induced by G1 in males. The three endothelial autacoids (NO, PGI2 e EDHF) seem to mediate the relaxation induced by GPER agonist in females. These findings can contribute to a better understanding of G1 action on cardiovascular system, in order to make it a potential drug therapy to be used in postmenopausal period, based on the presented effects on coronary bed.eng
dc.description.resumoAs doenças cardiovasculares representam a principal causa de morte nos países industrializados. Além disso, a incidência de doenças cardiovasculares aumenta de forma significante em mulheres na pós-menopausa, possivelmente por redução dos níveis de estrogênios. Os estrogênios exercem seus efeitos genômicos por meio da ativação de seus receptores nucleares α e β, além de efeitos não genômicos via ativação de um terceiro receptor de estrogênio descoberto recentemente, denominado receptor de estrogênio acoplado a proteína G (GPER), também conhecido como GPR30. As funções do GPER foram descritas principalmente no sistema cardiovascular. Estudos realizados em vasos isolados coronarianos demonstraram que a ativação do GPER promove vasodilatação de maneira dependente e independente do endotélio. No entanto, no leito coronariano, o papel deste receptor ainda não foi descrito. O objetivo do nosso estudo foi analisar a ação do G1, agonista específico do GPER, no leito vascular coronariano de ratos normotensos de ambos os sexos. Ratos Wistar com 10 semanas de idade foram divididos em 2 grupos: machos e fêmeas. Os animais foram anestesiados, o tórax foi aberto, o coração foi retirado e perfundido rapidamente com solução nutridora a 37º C com fluxo constante de 10 mL/min, segundo a técnica de Langendorff. Após um período de 40 minutos de estabilização a pressão de perfusão coronariana foi determinada. Curva dose resposta de G1 (600 a 10.000 nM) foi realizada antes e após a realização dos seguintes protocolos: Inibição da enzima óxido nítrico sintase (NOS) com L NAME, inibição da enzima ciclooxigenase (COX), inibição da enzima citocromo P450 (CYP), inibição associada da NOS e COX, inibição associada da NOS e CYP, inibição tripla da NOS, COX e CYP, bloqueio dos canais para potássio com tetraetilamônio (TEA) e bloqueio com antagonista específico do GPER (G36). Além desses protocolos, a pressão arterial sistólica (PAS) desses animais foi mensurada por pletismografia de cauda. Fizemos também a dissecção das coronárias descendente anterior e septal para realização de Western Blotting para avaliar a expressão do GPER, enzimas antioxidantes (SOD e catalase) e subunidade da NADPH oxidase. O estresse oxidativo em artérias coronárias foi avaliado por fluorescência ao DHE. Nossos resultados mostram a existência de uma diferença na PAS e PPC entre machos e fêmeas. A PAS mostrou-se elevada em machos, sendo que a PPC foi maior nas fêmeas. O G1 promoveu vasodilatação no leito coronariano de ratos de ambos os sexos sendo essa resposta mais pronunciada em fêmeas. A expressão do GPER, SOD e catalase foi similar entre os grupos. A expressão da gp91phox e o estresse oxidativo foram maiores em machos. A dilatação ao G1 em fêmeas foi reduzida após inibição individual da NOS, COX e CYP, após inibição combinada da NOS + CYP e após inibição tripla da NOS + COX + CYP. Ao utilizar G36 na preparação experimental, a vasodilatação neste grupo foi revertida em vasoconstrição. Após o uso do TEA a dilatação em fêmeas e machos foram maiores. O relaxamento foi reduzido nos machos após inibição individual da COX e CYP e após inibição combinada da NOS + COX. O uso do G36 aboliu o relaxamento neste grupo. Com base nos resultados obtidos, concluímos que o G1 dilata o leito vascular coronariano de ratos wistar de ambos os sexos e essa resposta é menos pronunciada em machos, provavelmente porque neste grupo a produção de espécies reativas de oxigênio é maior. Além disso, o NO não participa da resposta de relaxamento induzida pelo G1 em machos. Os três autacóides endoteliais (NO, PGI2 e EDHF) parecem mediar o relaxamento induzido pelo agonista do GPER em fêmeas. Esses achados podem contribuir para o melhor entendimento das ações do G1 sobre o sistema cardiovascular, de forma a tornar esse fármaco uma potencial terapia a ser utilizada na pós-menopausa baseada nos efeitos observados no leito coronariano.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/8007
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Ciências Fisiológicas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas
dc.rightsopen access
dc.subjectArtérias coronáriaspor
dc.subjectVasodilataçãopor
dc.subjectIdentidade de gêneropor
dc.subject.cnpqFisiologia
dc.subject.udc612
dc.titleAvaliação do efeito do agonista do receptor de estrogênio acoplado a proteína g (g1) sobre o tônus e reatividade vascular coronariana em ratos normotensos de ambos os sexos
dc.typemasterThesis
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