Desenvolvimento de um método para o diagnóstico do complexo do Pineapple mealybug wilt-associated virus

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dc.contributor.advisor1Ventura, José Aires
dc.contributor.authorAmorim, Walkíria Andrade de
dc.contributor.referee1Silva, Diolina Moura
dc.contributor.referee2Schuenck, Ricardo Pinto
dc.contributor.referee3Zerbini Junior, Francisco Murilo
dc.contributor.referee4Zerbini, Poliane Alfenas
dc.date.accessioned2018-08-01T21:35:22Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T21:35:22Z
dc.date.issued2016-09-27
dc.description.abstractPineapple mealybug wilt associated virus species (PMWaV) in association with Dysmicoccus brevipes cause mealybug wilt of pineapple. Virus dissemination occurs primarily through infected and asymptomatic propagative material. In this work, we validated a molecular methodology by RT-qPCR, to detect of the PMWaV-1, PMWaV-2 and PMWaV-3 virus in asymptomatic and symptomatic plants. Leaves and tissue culture plantlets from pineapple cultivars Smooth Cayenne, Pérola and Vitória were analysed by conventional RT-PCR and reverse transcription quantitative real-time (qRT-PCR). Mealybugs D. brevipes obtained from symptomatic wilt plants were analyzed. A specific genes for each virus of PMWaV was found in response to infection and was not expressed in healthy plant. In silico assessment four housekeeping were selected for accurate gene expression analysis in pineapple during biotic stress by RTqPCR. PMWaV-3 virus was prevalent in symptomatic and asymptomatic plants, and associated with PMWaV-2 virus in the symptomatic wilt plants. PMWaV-1 virus did not exhibited direct relation with the disease. The nutritional status of plants influenced the onset of symtoms and presence of PMWaV-2 virus. The PMWaV-1, PMWaV-2 and PMWaV-3 virus were detected in mealybugs colleted from diseased plants. Our results demonstrated transmission of the PMWaV-2 and PMWaV-3 by mealybugs. However, D. brevipes was not a good vector of PMWaV-1. This research provided a method for indexing plants for production or certification healthy propagative material. This prevent the spread of virus by propagation material to new crops areas and an important tool for epidemiological study of the mealybug wilt of pineapple. These is the first validation of an accurately method to detect three PMWaVs virus in asymptomatic and symptomatic plants.eng
dc.description.resumoO Pineapple mealybug wilt-associated virus (PMWaV) em associação com a cochonilha Dysmicoccus brevipes tem sido reportado como a causa da murcha do abacaxizeiro. A disseminação do vírus ocorre principalmente através de material propagativo infectado e assintomático. Neste trabalho foi validada uma metodologia por PCR em tempo real, como estratégia, para o diagnóstico dos vírus: PMWaV-1, PMWaV-2 e PMWaV-3, em abacaxizeiro. Folhas de plantas adultas e mudas de abacaxizeiro das cultivares Smooth Cayenne, Pérola e Vitória foram analisadas por RT-PCR convencional e em tempo real. Cochonilhas D. brevipes provenientes de plantas com sintomas de murcha também foram analisadas. Genes específicos para cada vírus foram obtidos em resposta a infecção. Análise in silico identificou quatro genes de referência para folhas e material propagativo de abacaxizeiro sob estresse biótico. O vírus PMWaV-3 foi prevalente nas plantas sintomáticas e assintomáticas, enquanto que o PMWaV-2 foi encontrado nos abacaxizeiros assintomáticos, e associado vírus PMWaV-3 nas plantas doentes. O vírus PMWaV-1 não mostrou relação direta com a doença. Observou-se que o estado nutricional da planta interferiu na manifestação dos sintomas e na presença do PMWaV-2. Os três vírus foram detectados em amostras da cochonilha D. brevipes. Confirmou-se também a transmissão dos vírus por esta espécie de cochonilhas, porém, não foi vetor eficiente para o PMWaV-1. Com este estudo disponibilizou-se um método de diagnóstico que atende as exigências fitossanitárias para indexação e certificação quarentenária de mudas comerciais. Isso contribui para prevenir a disseminação do vírus em material propagativo para novas áreas e uma ferramenta para estudo epidemiológico da doença. Essa é a primeira validação de um método rápido, sensível e específico, capaz de detectar os três vírus do PMWaV em plantas em abacaxizeiros assintomáticos e sintomáticas.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/7148
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsopen access
dc.subjectHousekeepingeng
dc.subjectPropagative materialeng
dc.subjectqRT-PCReng
dc.subjectDysmicoccus brevipespor
dc.subjectAnanas comosus var. comosuspor
dc.subjectMaterial propagativopor
dc.subjectPCR tempo realpor
dc.subject.cnpqBiotecnologia
dc.subject.udc61
dc.titleDesenvolvimento de um método para o diagnóstico do complexo do Pineapple mealybug wilt-associated virus
dc.typedoctoralThesis
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