Determinação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicos

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dc.contributor.advisor-co1Gonçalves, Juliana Barbosa Coitinho
dc.contributor.advisor1Santos, Alexandre Martins Costa
dc.contributor.authorRosa, Dayanne Pinho
dc.contributor.referee1Fernandes, Patrícia Machado Bueno
dc.contributor.referee2Cicilini, Maria Aparecida
dc.contributor.referee3Bem, Daniela Amorim Melgaço Guimaraes do
dc.date.accessioned2018-08-01T22:57:53Z
dc.date.available2018-08-01T22:57:53Z
dc.date.issued2017-02-23
dc.description.abstractOrganic solvents are common in industrial processes that use enzymes but, at the same time, it is known that they change the properties thereof, thus the effects of aqueous-organic solvent (ethanol) in different concentration on the α-trypsin structure have been investigated by spectroscopic techniques and thermodynamic data analysis. The results from spectroscopic measurements, including far-UV Circular Dichroism, UV-Vis absorption spectroscopy, intrinsic tryptophan fluorescence and dynamic light scattering (DLS) suggest the formation of partially folded states, instead of aggregates states, at high ethanol concentration (> 60% v/v ethanol), with little loss of secondary structure, but with significant tertiary structure changes. The thermodynamic data (Tm and ∆H) suggest a loosen of intramolecular weak interactions, which reflects in a flexibility increase such that the catalytic capacity can be increased or decreased according to the ethanol concentration into the system. Overall results we suggest that in range of 0-60% v/v ethanol/buffer, α-trypsin undergoes reversible multimerization phenomena maintaining its catalytic activity. However from 60% v/v ethanol/buffer, population of folded partially states with less catalytic activity are predominant.eng
dc.description.resumoOs solventes orgânicos são comuns em processos industriais que utilizam enzimas, mas, ao mesmo tempo, sabe-se que alteram suas propriedades. Assim, os efeitos do solvente orgânico aquoso (etanol) em diferentes concentrações na estrutura α- tripsina foram investigadas por técnicas espectroscópicas e análise de dados termodinâmicos. A espectroscopia de absorção UV-Vis, a fluorescência intrínseca do triptofano e o espalhamento dinâmico da luz (DLS) sugerem a formação de estados parcialmente dobrados, em vez de estados agregados, em alta concentração de etanol (> 60% v/v de etanol/tampão), exibindo pouca perda de estrutura secundária, mas alterações significativas na estrutura terciária. Os dados termodinâmicos (Tm e ∆H) sugerem um afrouxamento de interações intramoleculares fracas, o que se reflete em um aumento de flexibilidade de tal forma que a capacidade catalítica pode ser aumentada ou diminuída de acordo com a concentração de etanol no sistema. Os resultados globais sugerem que na faixa de 0-60% v/v de etanol/tampão, a α- tripsina sofre fenômenos de multimerização reversíveis, mantendo a sua atividade catalítica. No entanto a partir de 60% v/v de etanol/tampão, a população de estados parcialmente enovelados com menor atividade catalítica é predominante. Palavras chaves: tripsina, isoformas, enzimologia, solventes orgânicos, estrutura, termodinâmica.
dc.formatText
dc.identifier.citationROSA, Dayanne Pinho. Determinação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicos. 2017. 62 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica e Farmacologia) - Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Farmacologia, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2017.
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/7866
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Bioquímica e Farmacologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Bioquímica e Farmacologia
dc.rightsopen access
dc.subject.br-rjbnTripsina
dc.subject.br-rjbnEnzimas
dc.subject.br-rjbnTermodinâmica
dc.subject.br-rjbnProteínas
dc.subject.cnpqFarmacologia Bioquímica e Molecular
dc.subject.udc61
dc.titleDeterminação de parâmetros estruturais e termodinâmicos da isoforma a-tripsina bovina em solventes aquo-orgânicos
dc.typemasterThesis
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