Autenticação de Ginseng brasileiro utilizando a técnica de High Resolution Melting (HRM)

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dc.contributor.advisor1Paneto, Greiciane Gaburro
dc.contributor.authorAlmeida, Francine Alves Nogueira de
dc.contributor.referee1Ferreira, Marcia Flores da Silva
dc.contributor.referee2Moura Neto, Rodrigo
dc.date.accessioned2018-08-01T21:35:03Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T21:35:03Z
dc.date.issued2018-02-20
dc.description.abstractAs the herbal industry grows, the authenticity of its products is a matter of consumer safety and cannot be neglected. Brazilian Ginseng, for example, refers to two distinct species, Pfaffia glomerata and Hebanthe eriantha. Despite the similarity between these two species, which hinders morphological identification, they have different chemical and pharmacological properties. In this project we proposed a High Resolution Melting technique (HRM) as a tool to discriminate and identify P. glomerata and H. eriantha species using a matK and rbcL gene region. For this purpose, six reference samples were obtained, three of each of the aforementioned species, and 60 (sixty) commercial samples, sold as Brazilian Ginseng, through physical or online purchase. The DNA is extracted by the CTAB method and kit. The primer designed were tested through amplification by conventional PCR and confirmed in polyacrylamide gel before standardization of the PCR amplificationHRM and finally the results were compared to sequencing. Three primers were developed for the matK gene, two for the HRM-matKD and HRM-matK, and one for the rbcL gene , HRM-rbcL . During the standardization, the influence of the annealing temperature and the concentration of the primer on the race result was noticed, however, the extraction method did not change the results. The analysis of HRM showed that the first HRM-matKD was the one that met the proposed objective presenting high sensitivity (92-93%) and specificity (100%) compared to the sequencing method. It was possible to validate the HRM technique using previously sequenced commercial samples, which allows us to state that the HRM technique can be used to discriminate H. eriantha and P. glomerata. HRM is a fast and low cost method, being a reliable tool for identification of Brazilian Ginseng species.eng
dc.description.resumoÀ medida que a indústria de plantas medicinais cresce, a autenticidade de seus produtos é uma questão de segurança do consumidor e não pode ser negligenciada. O Ginseng brasileiro, por exemplo, se refere a duas espécies distintas, Pfaffia glomerata e Hebanthe eriantha. Apesar da similaridade entre essas duas espécies, o que dificulta a identificação morfológica, elas possuem propriedades químicas e farmacológicas distintas. Foi proposto que a técnica de High Resolution Melting (HRM) como uma ferramenta para discriminar e identificar as espécies P. glomerata e H. eriantha utilizando uma região do gene matK e rbcL. Para tal, foram adquiridas seis amostras referência, três de cada uma das espécies citadas, e 60 amostras comerciais, vendidas como Ginseng brasileiro, por meio de compra física ou online. O DNA foi extraído pelos métodos CTAB e por Kit. Os primers desenhados foram testados através da amplificação por PCR convencional e confirmado em gel de poliacrilamida antes da padronização da amplificação por PCR-HRM e por fim os resultados foram comparados aos de sequenciamento. Foram desenvolvidos três primers dois para o gene matK, HRM-matKD e HRM-matK, e um para o gene rbcL, HRM-rbcL. Durante a padronização notou-se a influência da temperatura de anelamento e concentração do primer no resultado da corrida, entretanto o método de extração não alterou os resultados. A análise de HRM mostrou que o primer HRM-matKD foi o que atendeu ao objetivo proposto apresentando alta sensibilidade (92-93%) e especificidade (100%) comparado ao método de sequenciamento. Foi possível validar a técnica de HRM utilizando amostras comerciais previamente sequenciadas, o que nos permite afirmar que a técnica de HRM pode ser utilizada para discriminar H. eriantha e P. glomerata. HRM é um método rápido e de baixo custo, sendo uma ferramenta confiável para identificação de espécies de Ginseng brasileiro.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/7113
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsopen access
dc.subjectIdentificationeng
dc.subjectMedicinal planteng
dc.subjectAdulterationeng
dc.subjectPfaffiapor
dc.subjectHebanthepor
dc.subjectIdentificaçãopor
dc.subjectPlanta medicinalpor
dc.subjectAdulteraçãopor
dc.subject.br-rjbnGinseng-brasileiro
dc.subject.br-rjbnPlantas medicinais
dc.subject.br-rjbnPlantas - Biologia molecular
dc.subject.cnpqBiotecnologia
dc.subject.udc61
dc.titleAutenticação de Ginseng brasileiro utilizando a técnica de High Resolution Melting (HRM)
dc.typemasterThesis
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