Estudo da expressão de PHD3, HIF1-α e SOD1 em modelo experimental de câncer colorretal tabagista e resposta a radioterapia

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dc.contributor.advisor1Conforti, Adriana Madeira Álvares da Silva
dc.contributor.authorTrivilin, Leonardo Oliveira
dc.contributor.referee1Paula, Flávia de
dc.contributor.referee2Nogueira, Breno Valentim
dc.contributor.referee3Silva, Eloiza Helena Tajara da
dc.contributor.referee4Boeloni, Jankerle Neves
dc.date.accessioned2018-08-01T21:35:17Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T21:35:17Z
dc.date.issued2016-05-19
dc.description.abstractSmoking is a risk factor for colorectal cancer development and interferes on protein expression involved on tumoral progression, prognostic and therapeutic response. Thus, the objective was to study PHD3, HIF1-α and SOD-1 expression, as well as response to radiotherapy in experimental model for colorectal cancer exposed to cigarette smoke. It was used 53 young male rats Wistar, weighing on average 181,35g (±18,7g). Five animals were kept as negative control DMH-/tobacco- (G0).The induction of colorectal carcinogenesis with DMH during five weeks has been conducted on 48 animals, divided on experimental groups consisting of 12 animals each: DMH+ group (G1), DMH+/radiotherapy group (G2), DMH+/tobacco+ group (G3) and DMH+/tobacco+/radiotherapy group (G4). The exposure of G3 and G4 groups to cigarette smoke occurred in inhalation chamber equipped with smoke puff, and corresponded to 12 cigarettes/day divided into two exposure shifts of 60 minutes each, over 143 days. In the 21th experiment week, G2 and G4 animals underwent three radiotherapy sessions at a dose of 700 cGy each, totaling 2500 cGy. At 22 weeks, all animals were euthanized for removal of >0.1 cm injuries, processed histologically and stained with Hematoxylin-Eosin for diagnosis. It was selected samples classified as tubular adenocarcinoma (G1, G2, G3, G4) and normal mucosa for immunohistochemical technique for proteins PHD3, HIF1-a, SOD1 and cleaved caspase-3. The radiation response was obtained by apoptotic index of G2 and G4 groups. In G1 group were found dysplastic lesions, benign and malignant, moderate to severe inflammation and severe to moderate pleomorphism. In G3 were found dysplastic and malignant lesions, mild to moderate inflammation and mild to moderate pleomorphism. PHD3 protein suffered downregulation in G1, G3 and G4, more expressed in G2 (p=0.0011). HIF1-α protein was less expressed in G1 (p=0.0005) and increased its expression in this group after radiotherapy compared to others. SOD-1 was more expressed in G1, and after radiotherapy in G4 (p=0.005). The apoptotic index was significantly higher in G4 (p = 0.0289). Malignancies were predominant in exposed to cigarette smoke experimental model indicating its use in studies of smokers prognostic and survival, through use of molecular tools and, PHD3 downregulation, HIF-1alpha upregulation and levels of SOD-1 lower than unexposed animals, led to better radiotherapy response.eng
dc.description.resumoO tabagismo é um fator de risco para o desenvolvimento de câncer colorretal e pode interferir na expressão de proteínas envolvidas na progressão tumoral, prognóstico e resposta terapêutica. Assim, objetivou-se estudar a expressão de PHD3, HIF1-α e SOD1, bem como resposta a radioterapia em modelo experimental para câncer colorretal tabagista. Utilizou-se 53 ratos Wistar, machos jovens, pesando em média 181,35g (±18,7g). Cinco animais foram mantidos como controle negativo DMH- /tabaco- (G0). Induziu-se carcinogênese colorretal com DMH durante cinco semanas, em 48 animais, que foram divididos em grupos experimentais contendo 12 animais cada: grupo DMH+ (G1), grupo DMH+/radioterapia (G2), grupo DMH+/tabaco+ (G3) e grupo DMH+/tabaco+/radioterapia (G4). A exposição dos grupos G3 e G4 à fumaça do cigarro ocorreu em câmara de inalação equipada com puff de fumaça, e correspondeu a 12 cigarros/dia divididos em dois turnos de exposição de 60 minutos cada, durante 143 dias. Na 21ª semana de experimento os animais dos grupos G2 e G4 foram submetidos à três sessões de radioterapia na dose de 700 cGy cada, totalizando 2500 cGy. Na 22ª semana, os animais foram eutanasiados para a retirada das lesões acima de 0,1 centímetro em sua maior porção, que foram fixadas, processadas histologicamente e coradas com Hematoxilina-eosina para diagnóstico. Selecionou-se as amostras classificadas como adenocarcinoma tubular (G1, G2, G3 e G4) e mucosa normal (G0) para a aplicação da técnica imunohistoquímica para as proteínas PHD3, HIF1-α, SOD1 e Caspase 3 clivada. A resposta à radioterapia foi obtida por meio do índice apoptótico das amostras pertencentes aos grupos G2 e G4. No grupo G1 encontrou-se lesões displásicas, benignas e malignas, inflamação moderada a severa e pleomorfismo moderado a severo. No grupo G3 encontrou-se lesões displásicas e malignas, inflamação branda a moderada e pleomorfismo brando a moderado. A PHD3 foi subexpressa nos grupos G1, G3 e G2, sendo mais expressa no grupo G4 (p=0,0011). A HIF1-α foi menos expressa no grupo G1 (p=0,0005) e após radioterapia aumentou sua expressão nesse grupo, em relação aos outros. A SOD1 foi mais expressa no grupo G1, e após radioterapia no grupo G4 (p=0,005). O índice apoptótico foi significativamente maior no grupo G4 (p=0,0289). Neoplasias malignas predominaram no modelo experimental de câncer colorretal exposto à fumaça do cigarro indicando sua utilização em estudos prognósticos e sobrevida de pacientes tabagistas, pelo uso de ferramentas moleculares, e que a subexpressão de PHD3, a superexpressão de HIF1-α e níveis de expressão de SOD1 abaixo daquele de neoplasia de animais não expostos, culminaram com melhor resposta radioterápica.
dc.formatText
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/7130
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsopen access
dc.subjectCarcinogenesiseng
dc.subjectCancereng
dc.subjectTobaccoeng
dc.subjectBiomarkerseng
dc.subjectColorectaleng
dc.subjectCarcinogênesepor
dc.subjectNeoplasiapor
dc.subjectTabacopor
dc.subjectBiomarcadorespor
dc.subjectCólon e retopor
dc.subject.cnpqBiotecnologia
dc.subject.udc61
dc.titleEstudo da expressão de PHD3, HIF1-α e SOD1 em modelo experimental de câncer colorretal tabagista e resposta a radioterapia
dc.typedoctoralThesis
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