Desenvolvimento de processo para a purificação de bromelina a partir de resíduos de abacaxizeiro (Ananas comosus var. comosus) cv. Vitória

Página do item simplificado
dc.contributor.advisor1Ventura, José Aires
dc.contributor.authorCosta, Helber Barcellos da
dc.contributor.referee1Kuster, Ricardo Machado
dc.contributor.referee2França, Hildegardo Seibert
dc.contributor.referee3Costa, Hélcio
dc.contributor.referee4Romão, Wanderson
dc.date.accessioned2016-08-29T15:34:42Z
dc.date.available2016-08-29T15:34:42Z
dc.date.issued2014-02-20
dc.description.abstractabstracteng
dc.description.resumoAtualmente existe uma crescente demanda pelo uso de enzimas com aplicação industrial e terapêutica. Dentre a vasta aplicabilidade das enzimas merecem destaque as proteases que representam 60 % do total das enzimas utilizadas no mundo. A bromelina é uma protease com relevância na indústria alimentícia, cosmética, farmacêutica e biotecnológica, de alto valor comercial, que pode ser obtida a partir de resíduos do abacaxizeiro. O Brasil está entre os primeiros produtores mundiais de abacaxi, sendo que os resíduos agrícolas e agroindustriais não tem destino, podendo ser utilizado como fonte de obtenção de bromelina. Este trabalho objetiva desenvolver uma nova metodologia de purificação de bromelina a partir de resíduos do abacaxizeiro cv. (cultivar) Vitória. O trabalho está dividido em quatro capítulos. 1: Foram comparadas as características-físico químicas (Sólidos solúveis totais (SST), acidez titulável (AT) e a razão SST/AT), protéicas e de atividade de bromelina entre os frutos das cvs. Vitória e Pérola em diferentes estádios de maturação, e constatado que a cv. Vitória (resistente à fusariose) apresenta características semelhantes ou superiores à cv. Pérola, o que contribui para sua aceitação pelo mercado consumidor e a consequente ampliação do seu cultivo, tornando viável a utilização de seus resíduos como fonte de obtenção de bromelina; 2:Realizou-se uma comparação entre cinco diferentes soluções de extração de bromelina (H2SO4/ Na2SO4 pH 4,5; Tampões acetato pH 3,6; 4,0 e 5,0 e tampão fosfato pH 7) e entre dois métodos de precipitação fracionada (acetona gelada e sulfato de amônio) e diferentes cromatografias de troca iônica (DEAE-celulose, SP-Sepharose e CM-Celulose). A solução de extração H2SO4/Na2SO4 pH 4,5 apresentou o maior rendimento de proteínas totais e atividade proteolítica e atividade específica. Na precipitação fracionada, as frações 20-50 % (F2S) e 50-75 % (F3S) de saturação por sulfato de amônio renderam maiores valores de atividade proteolítica com 88,57 % e 98,42 % respectivamente, quando comparadas à precipitação por acetona gelada. Durante a purificação, a fração F3S foi aplicada em diferentes resinas de troca iônica e observou-se que aCMC manteve os valores de atividade proteolítica mais elevados (89,31%); 3: Uma nova metodologia de purificação foi desenvolvida utilizando CMC e Sephadex® G-50, obtendo uma bromelina pré purificada (FP 3,01 93% de atividade) e bromelina purificada (FP 16,86 89% de atividade). A pureza da bromelina foi confirmada por SDS-PAGE revelando apenas uma banda em 30 KDa, por HPLC com apenas um pico nos primeiros 10 minutos e, por espectrometria de massas (MALDI-TOF MS) através do Peptidemassfingerprint (PMF) da enzima. Além da fragmentação (MALDI-TOF MS/MS) e sequenciamento de dois peptídeos m/z 951 e 1584; 4:Foi realizado uma caracterização cinética da bromelina pré-purificada e purificada. A bromelina pré-purificada apresenta duas temperaturas ótimas (40 e 60ºC) e um pH ótimo (8) e que a bromelina purificada apresenta temperatura ótima de 60 ºC e pH ótimo de 8. Por fim,é possível afirmar que os resíduos de abacaxi da cv. Vitória foram uma boa fonte de obtenção de bromelina. A metodologia desenvolvida foi inovadora e possibilitou obter bromelina com alto grau de pureza e maior viabilidade de execução por reduzir os passos de sua purificação comparada com as metodologias existentes.
dc.formatText
dc.identifier.citationCOSTA, Helber Barcellos. Desenvolvimento de Processo para a Purificação de Bromelina a partir de Resíduos de Abacaxizeiro (Ananas Comosus var. Comosus) cv. Vitória. 2014. 150 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2014.
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufes.br/handle/10/4519
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Biotecnologia
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biotecnologia
dc.rightsopen access
dc.subjectProteolytic enzymeseng
dc.subjectBromelaineng
dc.subject.br-rjbnEnzimas proteolíticas
dc.subject.br-rjbnBromelina
dc.subject.cnpqBiotecnologia
dc.subject.udc61
dc.titleDesenvolvimento de processo para a purificação de bromelina a partir de resíduos de abacaxizeiro (Ananas comosus var. comosus) cv. Vitória
dc.typedoctoralThesis
Arquivos
Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Imagem de Miniatura
Nome:
tese_7411_Tese_Helber Barcellos.pdf
Tamanho:
1.8 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descrição:
Baixar
Coleções
PPGBIO - Teses de doutorado